產品描述
本品是采用大腸桿菌TOP10菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。本品使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108 cfu/μg，廣泛適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。
TOP10感受態細胞基因型：F-mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Strr) endA1 nupG
TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學感受態細胞）
運輸與保存方法
干冰運輸。
TOP10感受態細胞-80℃保存，pUC19質粒-20℃保存。有效期半年。
注意事項
1）感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。
2）整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。
3）為確保*高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學感受態細胞）4）為防止轉化不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，*低化實驗可能遇到的風險。
使用方法
1）取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。
【注】：一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用，應注意所用的DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。
2）向100 μl感受態細胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30min。TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學感受態細胞）
3）將離心管置于42℃水浴中放置60-90 s，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3min，該過程不要搖動離心管。
4）向離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養基（不含***），混勻后置于37℃搖床振蕩培養45 min（150 rpm）， 目的是促使菌體復蘇，抗性基因表達。
5）將離心管內容物混勻，吸取100μl已轉化的感受態細胞加到含相應***的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃培養12-16 h。
TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學感受態細胞）【注】：涂布菌液多少可根據轉化DNA量來調整。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養液，重新懸浮菌體后將其涂布在一個平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之內可重新涂板。
