產品描述
本品是在具有大腸桿菌BL21菌株基礎上制備的化學轉化感受態細胞,補充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA,提供外源基因(尤其是真核基因)在原核系統中的表達水平。經pUC19質粒檢測,轉化效率可達107 cfu/μg。
本品具有氯霉素抗性。Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態細胞
運輸和保存方法
干冰運輸。
Rosseta(DE3)感受態細胞于-80℃保存,pUC19質粒≤-20℃保存。有效期半年。
注意事項
1)感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用,避免反復凍融。
2)待轉化DNA加入感受態細胞后,請勿用移液槍吹打,輕輕彈勻即可。
3)為確保*高效率轉化,整個操作過程應盡量輕柔,并保持低溫。Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態細胞
4)本品應于-80℃保存,請勿將感受態細胞儲存于-20℃或液氮中保存。
5)整個轉化過程請于無菌條件下操作。
6)為了您的**和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1)將感受態細胞從-80℃中取出,置于冰水浴中融化。
2)將待轉化DNA加入到100 μl感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育30分鐘。
Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態細胞【注】:① 通常100μl感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和;
② 待轉化DNA加入體積不要超過感受態細胞體積的1/10。
3)42℃水浴,不要晃動,準確熱激45s后,立刻置于冰水浴中,靜置2-3分鐘。
4)向離心管中加入900 μl 不含***的LB或SOC培養基,混勻。
5)150 rpm, 37℃振蕩培養45分鐘,使菌體復蘇,抗性基因表達。
6)取適量已轉化細胞,加到含相應***的固體培養基上,輕輕涂勻。剩余菌液可在4℃保存,一周之內都可重新涂板。
【注】:如菌體量較少,也可2,500 g離心5分鐘,去掉900 μl上清。用剩余培養基將菌體重懸,用無菌涂布棒在含有正確抗性的平板上輕輕涂勻。
7)室溫正置10分鐘。待菌液被平板吸收后,37℃倒置培養過夜。Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態細胞