JM109 Chemically Competent Cell JM109化學感受態細胞

產品描述產品

在基因重組實驗中，常使用感受態細胞攝取外源DNA以制備基因文庫、重組質粒以及進行亞克隆等。

本品是經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。經使用pUC19質粒檢測，本品轉化效率可達10⁸ cfu/μg，廣泛適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。本品適用于藍白斑篩選，另對recA1和endA1進行特定的改造使其更能保證克隆DNA的穩定性以及更有利于高純度質粒DNA的提取。JM109 Chemically Competent Cell JM109化學感受態細胞

JM109感受態細胞基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 e14^-(mcrA^-) supE44 relA1 △(lac^-proAB)/F’ [traD36 proAB⁺lac Iq lacZ △M15]。

運輸與保存方法

干冰運輸。

JM109感受態細胞-80℃保存，pUC19質粒-20℃保存。有效期半年。JM109 Chemically Competent Cell JM109化學感受態細胞

注意事項

1）感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

2）整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。

3）為確保*高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫，避免移液槍吹吸。

JM109 Chemically Competent Cell JM109化學感受態細胞4）為防止轉化不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，*低化實驗可能遇到的風險。

使用方法

1）取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2）向100 μl感受態細胞懸液中加入2-10μl目的DNA或連接產物，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置20min。

3）將離心管置于42℃水浴中放置90s，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2min，該過程不要搖動離心管。

4）向離心管中加入500μl無菌的SOC或LB培養基（不含***），混勻后置于37℃搖床振蕩培養60min（200 rpm）， 目的是促使菌體復蘇，抗性基因表達。

5）將離心管內容物混勻，根據實驗要求（質粒，重組連接產物轉化），吸取不同體積已轉化的感受態細胞加到含相應***的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃培養12-16 h。JM109 Chemically Competent Cell JM109化學感受態細胞