DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學感受態細胞

產品描述

本品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。本品使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達10⁸ cfu/μg，廣泛適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。本品適用于藍白斑篩選，另對recA1和endA1進行特定的改造使其更能保證克隆DNA的穩定性。

DH5α感受態細胞基因型：F^-φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-arg ) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk^-, mk⁺) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1

DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學感受態細胞

運輸與保存方法

干冰運輸。

DH5α感受態細胞-80℃保存，pUC19質粒-20℃保存。有效期半年。

注意事項

1）感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

2）整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。

DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學感受態細胞3）為確保*高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。

4）為防止轉化不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，*低化實驗可能遇到的風險。

使用方法

1）取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

【注】：一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用，應注意所用的DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。

2）向100 μl感受態細胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30min。DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學感受態細胞

3）將離心管置于42℃水浴中放置45s~60s，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2min，該過程不要搖動離心管。

4） 向離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養基（不含***），混勻后置于37℃搖床振蕩培養45 min~60min（150 rpm）， 目的是促使菌體復蘇，抗性基因表達。

5）將離心管內容物混勻，吸取100μl已轉化的感受態細胞加到含相應***的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃培養12-16 h。

【注】：涂布菌液多少可根據轉化DNA量來調整。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養液，重新懸浮菌體后將其涂布在一個平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之內可重新涂板。DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學感受態細胞