漢坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
【包裝規格】48 份/盒
【檢測方法】RT-PCR 熒光探針法
【檢驗原理】
本試劑盒用特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對漢坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)RNA 進行體外擴增檢測,僅用于科研使用。
【試劑組成】
名 稱
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規 格
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酶液
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50μl×1 管
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反應液
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1.0ml×1 管
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陽性質控品
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50μl ×1 管
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陰性質控品
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250μl ×1 管
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漢坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJOpticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
剖檢豬取腸內容物和腸系膜**結;待檢活豬,取排泄物,于離心管中。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1樣本前處理
組織:分別從腸系膜**結的 3 個不同位置取樣,稱取樣品約 1g,用手術剪剪碎混勻,再稱取 0.05g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL **離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL **離心管中;排泄物:取 0.05g 于 1.5mL **離心管中,加入 1mL生理鹽水渦旋振蕩,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL **離心管中。
1.2RNA 提取
RNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準備區)
漢坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
3. 加樣(樣本處理區)
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴增(核酸擴增區)
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇:
檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環參數設置:
步驟
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循環數
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溫度
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時間
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收集熒光信號
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1
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1cycle
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42℃
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20min
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否
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2
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1 cycle
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95℃
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10min
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否
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3
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40 cycle
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94℃
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15sec
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否
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55℃
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30sec
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是
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5. 漢坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)結果分析判定
5.1結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
6. 檢測方法的局限性
? 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;
? 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
? 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
? 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
? 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;
? 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7. 質控標準
陰性質控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32;
以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
8. 產品性能指標
陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為 100%。
*低檢測限:5.0×102copies/ml。
精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
漢坦病毒Ⅰ型(HTV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)【注意事項】
? 所有操作嚴格按照說明書進行;
? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;
? 反應液應避光保存;
? 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;
? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;
? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物**通則》進行處理。
鯉春病毒(SVCV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
鯉春病毒(SVCV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
山羊痘(GPV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
伯氏疏螺旋體(BB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
蠶微粒子?。∟B)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
蠶微粒子?。∟B)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。